首先，研究人员使用智能seq研究下丘脑VMH区的细胞类型。采用nr5a1-cre转基因小鼠对下丘脑vmh区的大部分神经元（75%）进行特异性标记，流式细胞仪（facs）进行流式分类。该技术的细胞取样率较低，每只小鼠收集100个细胞的能力较小。结果，研究人员最终从54只小鼠中获得了4574个神经细胞，并分析了46个转录特异性细胞类型(图1A和C)。分子蒸馏设备生产厂家

根据差异表达基因和vmh区的解剖结构，根据核/壳形态将细胞进一步分为两类：vmh-out和vmh-in，其中vmh-in又进一步分为vmhc/花药vmh和vmhvl。下丘脑VMHv 1区共发现17种转录特异性细胞类型。

为了将smart-seq鉴定的17种转录特异性细胞类型与解剖位置联系起来，研究人员进行了序列荧光原位杂交（seqfish，图2a），并使用58个探针标记不同的smart-seq细胞类型。通过对seqfish和smart-seq聚类分析结果的比较，发现vmhvl的smart-seq群与seqfish的smart-seq群高度相关。（图2c），因此seqfish可以验证smart seq组的解剖位置。

研究人员希望进一步回答的问题是VMHvl转录特异性细胞类型是否能对应于具有不同投射特征的神经元群。研究人员使用esr1 cre小鼠进行逆向序列分析，向已知与vmhvl相关的脑区（mpoa、dpad和lpag）注射逆行aav，然后对fac和单个细胞进行序列分析（图3a-b）。他们发现，vmh转录特异性细胞类型具有明显的投射偏好，如主要位于vmhdm/c区的nr5a1+细胞群更倾向于与dpag投射，而位于vmhvl区的esr1+和dlk1+细胞更倾向于与dpag投射。

David Anderson小组一直在研究VMHvl区域不同的神经元群如何参与控制交配行为(交配)和攻击行为(攻击)。研究组采用了多种神经元活动记录技术，如多通道电生理记录、c-fos鲶鱼原位杂交和活体钙显像记录等，均显示该区神经元具有重叠和显著不同的神经元群。因此，下一个问题是VMHvl区转录特异性细胞类型的多样性是否与VMHvl神经元的活性有关。众所周知，用smart-seq分析ieg表达式是非常困难的。在几次尝试失败后，研究人员转而使用10X基因组进行IEG分析，并避免使用FACS进行细胞分类。最后，从90只小鼠下丘脑VMH中分离到约150000个单细胞。

对于这15万个单细胞，研究人员分析了29种转录特异性细胞类型，其中17种根据其标记物可分为vmhvl特异性细胞类型（图4e）。这些神经元也可分为三类，分别用esr1、satb2和dlk1标记。然后，研究人员利用八种不同的行为模式，基于10X技术，研究了转录特异性细胞类型与行为激活之间的关系。研究人员首先用fos作为神经元的激活标记，然后用139个不同的早期基因作为神经元的激活标记，最后用非活性依赖性差异表达基因进行区分，以研究转录特异性细胞类型与行为激活的关系。研究人员发现，对于大多数社会行为，1/3转录特异性细胞类型可以被激活，这些单细胞类型也可以被多种行为激活，少数群体只能被特定的行为模式所激活，例如Nup62cl组只能被社会恐惧行为激活，而Dlk 1_1组只能通过交配行为来激活。